如何运行分析

实现成功的分析所需的实验流程、技术与资源

您的 XF 仪器类型

本学习中心旨在向您介绍 Seahorse XF 分析工作流程，重点介绍实验流程与技术，确保获得最佳 XF 分析性能与结果。在您阅读每一部分时，流程是指使用安捷伦 Seahorse XF 细胞能量代谢表型测试实时 ATP 速率测定进行初始细胞表征。所述的技术适用于所有 Seahorse XF 分析，如接种贴壁细胞、加药口上样等。只有必需消耗品根据 XF 分析仪型号和 XF 测试试剂盒的不同而有所不同。使用下拉菜单选择您的 XF 分析仪，然后单击以下部分即可显示 XF 分析工作流程相应步骤的相关内容。

选择一个步骤显示内容

+ 收集分析材料

+ 准备进行 XF 分析

本部分重点介绍 XF 分析前一天的制备技术，包括细胞接种密度选择指导、XF 组织培养板上的贴壁细胞接种技术，以及 XF 探针板水化技术。

本部分重点介绍 XFp 分析前一天的制备技术，包括细胞接种密度选择指导、XFp 组织培养板上的贴壁细胞接种技术，以及 XFp 探针板水化技术。

在下图中选择一个工作流程步骤来显示帮助内容。

细胞接种密度

接种细胞

水化探针板

设计实验

选择细胞接种密度

选择细胞接种密度的基本流程

为使用安捷伦 Seahorse 细胞外流量分析仪有效检测代谢和生物能量代谢功能，首先需要根据细胞在基础呼吸和最大呼吸 (OCR) 以及细胞外酸化 (ECAR) 条件下的代谢活动，表征特定的细胞类型。Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒 Seahorse XFp 实时 ATP 速率测定试剂盒 Seahorse 细胞能量代谢表型测试试剂盒可以在单次检测中两次小分析中表征目标细胞系/细胞类型。

不同类型细胞的最佳细胞接种数量不同，但通常介于 5 × 10³ 至 4 × 10⁴ 细胞/孔之间。 1 × 10⁴ 至 8 × 10⁴ 细胞/孔之间。通常，可使融合度达到 50%–90% 的密度即可获得仪器理想/动态范围内的代谢率。

请参阅 Seahorse 细胞参考文献数据库和/或 XF 出版物数据库，提供满足您需要的细胞密度起始点。

接种细胞

接种贴壁细胞的基本流程（通常在 XFp 分析前一天进行）

对于需要测试的每个密度，根据指导接种贴壁细胞。查看接种悬浮细胞的说明。

安捷伦 Seahorse XFp 分析在安捷伦 Seahorse 96 孔 24 孔 8 孔 XFp 细胞培养微孔板迷你微孔板上，结合 XFe96 探针板进行。该流程描述了用于安捷伦 Seahorse 分析仪的贴壁细胞的接种建议。查看接种悬浮细胞的说明。

首次分析时，建议使用 XF96 细胞培养板、XFe96 探针板和 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒以及仪器测试四种不同的细胞密度。首次分析时，建议使用两个细胞培养板、两个探针板和 XF 细胞能量代谢表型测试试剂盒以及仪器测试四种不同的细胞密度和四种不同的 FCCP 浓度。首次分析时，建议使用 XF24 细胞培养微孔板、XFe24 探针板和 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒以及仪器测试四种不同的细胞密度。首次分析时，建议使用 XFp 细胞培养迷你孔板、XFp 探针板和 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒以及 XFp 仪器测试 2–4 种不同的细胞密度。

下图是一个用于接种四个细胞密度的建议 XF96 检测板布局：

细胞密度滴定分析接种

下图是一个用于接种四个细胞密度的建议检测板布局：

FCCP 浓度滴定分析接种

如果您已经进行了细胞接种密度分析且/或了解了每个孔的最佳细胞数，即可使用除背景校正孔之外的所有孔中接种的最佳细胞数（1.0 × 细胞/孔）进行 FCCP 滴定分析。否则，按照如下说明进行细胞接种和探针板水化/制备，并使用以下推荐的板布局测试四个浓度的 FCCP：

可选择两种工作流程：(1) 对于不限数量的细胞，可在多个 XFp 细胞培养迷你微孔板中以不同浓度接种，以缩短实验间的时间，更快地完成表征工作流程（快速工作流程）。(2) 对于数量有限的细胞，在第一次实验结果确定后，再制备更多细胞（标准工作流程）。

实验	原理	快速工作流程	标准工作流程
接种一个或多个不同密度的细胞，目测细胞融合度；选择迷你微孔板进行下一步骤。	为获得仪器动态范围内的代谢率，细胞融合度为 50%–90%。目测是得到细胞密度第一近似值的良好方法，可在每次分析时得到验证。	根据下图，以 2–4 种不同密度在 1–2 块迷你微孔板上接种。	在 1 块迷你微孔板上接种 1 个密度的细胞；水化 1 块 XFp 探针板。

接种贴壁细胞的基本流程（通常在 XF 分析前一天进行）

根据上述标准或快速工作流程，选择 2–4 个细胞密度进行测试。可选择上述参考文献中的范围，也可接种建议的细胞/孔数值 (1X) 加 0.5X、2X 和 4X 细胞/孔。
从蓝色盒子中取出三包迷你微孔板。
揭下密封箔，待用。
在细胞培养孔周围的保护槽中加入无菌水或 PBS。将 8 通道移液器设为 200 µL，填充保护槽两侧（每个腔室容纳两个吸头）。如果没有多通道移液器，向保护槽的每个腔室加入 400 µL 无菌水或 PBS（共 3200 µL）。
向 A 孔和 H 孔中加入 80 µL 生长培养基（无细胞），作为背景校正孔。
接种安捷伦 Seahorse XF24 细胞培养微孔板时建议采用两步接种过程。该两步过程可获得一致的单层细胞。
收集并重悬细胞，使其达到在 80 µL 生长培养基中接种的最终所需浓度。最佳细胞接种数量差别很大，通常为 5 × 10³ – 4 × 10⁴ 细胞/孔，但仍须根据经验确定。（如对于 1 × 10⁴ 细胞/孔，每 80 µL 重悬细胞 1 × 10⁴ = 1.25 × 10⁵ 细胞/mL）
收集并重悬细胞，使其达到在 100 µL 生长培养基中接种的最终所需浓度。最佳细胞接种数量差别很大，通常为 1 × 10⁴ – 8 × 10⁴ 细胞/孔，但仍须根据经验确定。（如对于 2 × 10⁴ 细胞/孔，每 100 µL 重悬细胞 2 × 10⁴ = 2.0 × 10⁵ 细胞/mL）
每孔接种 80 µL 细胞悬液；请勿在背景校正孔（A1、A12、H1、H12）中接种细胞。确保背景校正孔中仅有培养基（无细胞）。
每孔接种 100 µL 细胞悬液；请勿在背景校正孔（A1、B4、C3、D6）中接种细胞。确保背景校正孔中仅有培养基（无细胞）。
B–G 每孔接种 80 µL 细胞悬液；请勿在背景校正孔（A 和 H）中接种细胞。确保背景校正孔中仅有培养基（无细胞）。
重要：在室温下将板在组织培养罩中放置一小时。¹ 这一过程可以促进细胞分布，减少某些细胞类型的边缘效应。用显微镜观察贴壁情况。
将板置于标准细胞培养箱中，使细胞贴壁。贴壁能力强的细胞一般需要 1 小时左右即可贴壁，而贴壁能力弱的细胞则需要 5–6 小时。用显微镜观察贴壁情况。
一小时后，检查细胞的贴壁情况。
如果细胞贴壁情况较好，则分别向每个孔中额外加入 150 μL 细胞生长培养基（共 250 μL），然后将板转移至标准细胞培养箱。
如果细胞没有很好地粘附在板上，则还需要 1–5 小时使细胞牢固附着（在生物安全柜中），然后在每个孔中额外加入 150 μL 生长培养基（共 250 μL）并将板转移至标准细胞培养箱。
细胞贴壁后，向每个孔加入 150 µL 生长培养基，使每个孔的培养基总体积达到 250 µL。向孔中添加培养基时，由一侧缓慢加入，以免干扰新贴壁细胞。
将细胞置于细胞培养箱中培养过夜。用显微镜观察细胞的生长和健康状况。
¹Lundholt BK, Scudder KM, Pagliaro L. A simple technique for reducing edge effect in cell-based assays. J Biomol Screen. 2003 Oct;8(5):566-7

接种悬浮细胞的基本流程（通常在 XFp 分析当天进行）

按如下所述的方法制备涂覆 Cell-Tak 的细胞培养板迷你微孔板：

用于安捷伦 Seahorse 细胞培养微孔板迷你微孔板的最佳 Cell-Tak 溶液浓度为 22.4 µg/mL。
每次分析中，为每个板制备 2.5 mL 1.5 mL 0.25 mL 该溶液。参考制造商的方案制备该溶液。
在室温下向每个孔加入 25 50 µL 该溶液，培养 20 分钟。
用 200 µL 无菌水清洗每个孔两次。
涂覆 Cell-Tak 的 Seahorse 细胞培养微孔板迷你微孔板在 4 °C 下可以保存一周时间。
Cell-Tak 包被的细胞培养微孔板迷你微孔板在细胞接种前，必须在组织培养罩中放至室温。

+ 相关支持材料

水化探针板

水化探针板的基本流程

传感器探针板是 XFp 分析平台的重要组成部分。传感器探针板的每个探针尖均布满固态传感器材料，可通过检测 pH 和 O₂ 浓度数据的变化来计算代谢速率。为使传感器能够正常工作，必须对其进行充分水化处理。

在进行 XFp 分析前一天进行：

将至少 20 mL XF 校准液加入 50 mL 锥形管中。将其放置在无 CO₂ 培养箱中，37 °C 下培养过夜。
将至少 5 mL XF 校准液加入 15 mL 锥形管中。将其放置在无 CO₂ 培养箱中，37 °C 下培养过夜。
打开细胞外流量分析试剂盒，取出其中的内容物。
从绿色盒子中取出 3 包探针板。揭下密封箔，待用。
将传感器探针板倒置于工具板旁边。
将工具板与传感器探针板分开，并将传感器探针板倒置于工具板旁边。
向工具板的每个孔中加入 200 µL 组织培养级无菌水。
向每个腔室孔周围的保护槽填充 400 µL。
将传感器探针板降低到工具板上，将探针浸入水中。
确定水位足够高，可使传感器保持浸没状态。
将其放入无 CO₂ 培养箱中 37 °C 培养过夜。为防止水蒸发，确定培养箱适当经过加湿。

打开安捷伦 Seahorse 流量分析试剂盒，取出其中的内容物。
将传感器探针板倒置于工具板旁边。
向工具板的每个孔中加入 1 mL XF 校准液。
将 Hydro Booster 放置在工具板顶部。
通过 Hydro Booster 板上的开口将传感器探针板降低至工具板，使传感器浸没在 XF 校准液中。
确定 XF 校准液位足够高，可使传感器保持浸没状态。
将其放入无 CO₂ 培养箱中 37 °C 培养过夜。为防止 XF 校准液蒸发，培养箱应适当加湿。
重要说明：在将传感器探针板放入安捷伦 Seahorse 分析仪之前，必须先取下 Hydro Booster。否则可能会对传感器探针板和分析仪造成损害。参阅第 3 部分的进一步说明。

+ 相关支持材料

设计实验

Wave Desktop 软件可用于为 Seahorse XFe 和 XFp 分析仪设计 XF 分析。参考以下资料，了解关于使用 Wave Desktop 软件进行分析设计（包括分析模板的元素）、修改定制分析的仪器方案、管理模板文件和使用预添加目录的更多信息。

您可以利用 Wave Desktop 软件轻松创建和自定义分析模板文件，以便在 Seahorse 分析仪上分析。

什么是分析模板文件？将分析模板文件视为您在实验室笔记本中所设计实验的电子副本。分析模板文件中输入的信息将作为实验记录存储在结果文件中，可以由您或其他合作者进行共享和重新运行，在分析完成后为结果数据提供结构和组织，并在需要时为故障排除提供有价值的信息。

分析模板文件的 3 个元素是：

组定义
板布局
仪器方案

组定义

Open Wave 2.6 软件
单击模板（位于“Wave 主页”下方）
打开名为 XF 实时 ATP 速率测定的分析模板
在组定义视图中，您将看到加样策略、预处理、分析培养基和细胞类型的预添加信息。
双击预处理并删除“控制与实验”条目。
双击细胞类型并删除名为“细胞”的默认条目（请参阅细胞参考数据库）。
在细胞类型组定义中，单击细胞类型和添加来添加新的细胞类型条目，并输入要分析的细胞类型的名称。建议将接种密度添加到组名称中。例如，C2C12 细胞类型每孔接种密度为 20000 个细胞，则命名为：20k C2C12
每个细胞类型定义重复 3 次。

注意：由于 XFe24 分析仪的 24 孔微孔板形式，该细胞接种密度优化方案可以使用具有 4 种细胞接种密度的 1 个细胞板执行（每组 n = 5）。

注意：由于 XFe96 分析仪的 96 孔微孔板形式，该细胞接种密度优化方案可以使用具有 4 种细胞接种密度的 1 个细胞板执行（每组 n = 22–24）。
注意：由于 XFp 分析仪的 8 孔迷你微孔板形式，该细胞接种密度优化方案必须使用每板具有 2 种细胞接种密度的 2 个细胞板执行（每组 n = 3）。在设计分析模板时，您可以：
- 为第 3 和第 4 细胞接种密度组创建新的分析模板。
- 将 4 个细胞接种密度组添加到一个分析模板中，并在用细胞接种密度组 1 和 2 进行第一次测定后将第 3 和第 4 个细胞组重新分配到板布局。
- 在用细胞接种密度组 1 和 2 进行第一次测定后，重新命名该模板中的组。

生成组

下一步是将组分配至板布局。

板布局

单击功能区（在“分析导航”下方）中的板布局。
为板布局分配第一个细胞接种密度组。要为板布局分配组，请先单击组列表中的组名，然后：
- 单击列标题（即 1、2、3 等）或行标题（即 A、B、C 等）
- 用鼠标左键单击在板布局上拖放一个孔区域。
- 单击板布局上的单个孔（不建议用于此分析模板）。
重复下一个细胞接种密度组。建议板布局如上图/下图所示。

仪器方案

单击功能区（在“分析导航”下方）中的仪器方案，查看或编辑仪器方案。
注意：默认仪器方案不需要修改，但您可以更改方案命令的名称、加样之前/之后的测定次数或每次测定执行的时长。
- 修改仪器方案设置将直接影响测定过程中数据的采集方式。对于此示例，使用（并推荐）默认的仪器方案。
- 如果您需要修改默认仪器方案，在执行细胞接种密度优化分析之前，建议您查看 Wave 用户指南中的仪器方案部分，如有必要请联系安捷伦细胞分析技术支持。
最后，单击功能区（在“分析导航”下方）中的运行分析添加其他实验详细信息，保存模板文件，然后启动细胞接种密度优化分析。

单击功能区（在“分析导航”下方）中的运行分析，添加其他实验详细信息并保存模板文件。
按照 XFp 细胞外流量分析仪用户指南中概述的步骤将分析模板文件转移至 XFp 分析仪，以进行第一次细胞接种密度优化分析。

+ 相关支持材料

+ 设置 XF 分析

本部分重点介绍进行 XFp 分析当天所需要的技术，包括分析培养基制备。接种非贴壁细胞并在 XFp 传感器探针板加药口对注射溶液加样。

在下图中选择一个工作流程步骤来显示帮助内容。

制备探针板/培养基

洗涤细胞

组合溶液

溶液上样

制备探针板和分析培养基

制备探针板

从培养箱中取出装有校准液的锥形管和带有工具板的组装传感器探针板。
将传感器探针板倒置于工具板旁边。
倒出并弃去工具板中的水。
向工具板的每个孔中加入 200 µL 预热的 XF 校准液。
向每个腔室孔周围的保护槽填充 400 µL XF 校准液。
将传感器探针板降低到工具板上，将探针浸入校准液中。
在传感器探针板的加药口加样之前，将带工具板的组装传感器探针板放入无 CO₂ 培养箱中，37 °C 培养 45–60 分钟。

从培养箱中取下带 Hydro Booster 和工具板的组装传感器探针板。
将传感器探针板倒置于工具板旁边。
取出并丢弃 Hydro Booster。
将传感器探针板降低到工具板上，将探针浸入校准液中。
将带工具板的组装传感器探针板放回无 CO₂ 的 37 °C 培养箱中，直到在传感器探针板的加药口加样。

将带工具板的组装传感器探针板放入无 CO₂ 的 37 °C 培养箱中培养，直到在传感器探针板的加药口加样。

制备 XF 分析培养基

Seahorse 分析需要特定培养基，以确保代谢活动功能测定数据的准确性与一致性。

安捷伦提供的即用型低缓冲培养基 pH 预调节至 7.4 并含有兼容补充剂，可简化分析制备并提供一致性的分析条件。查看关于这款即用型 XF 分析培养基系统的订购信息或下载培养基选择指南。

或者，研究人员可以使用与所用分析试剂盒匹配的一种成分配制培养基。所有成分均可使用一种安捷伦 Seahorse XF 培养基制备，根据具体分析设计添加不同底物/缓冲液，以下示例是细胞能量代谢表型测试 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定。

研究人员应使用与所用分析试剂盒匹配的一种成分配制 XF 分析培养基。所有成分均可使用一种安捷伦 Seahorse XF 培养基制备，根据具体分析设计添加不同底物/缓冲液，以下示例是细胞能量代谢表型测试 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒。

制备以下 XF 分析培养基与 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒细胞能量代谢表型测试一起使用。

安捷伦试剂/安捷伦部件号	最终浓度	体积
Seahorse XF DMEM 培养基，pH 7.4^{a, b}/103575-100 或 Seahorse XF RPMI 培养基，pH 7.4^{a, b}/103576-100 XF 基础培养基（不含酚红）^{a, b}/103335-100 或 XF RPMI（不含酚红）^{a, b}/103336-100	-	97.0 mL 9.70 mL
Seahorse XF 葡萄糖（1.0 mol/L 溶液）/103577-100	10 mmol/L	1.0 mL 100 µL
Seahorse XF 丙酮酸盐（100 mol/L 溶液）/103578-100	1 mmol/L	1.0 mL 100 µL
Seahorse XF L-谷氨酰胺（200 mol/L 溶液）/103579-100	2 mmol/L	1.0 mL 100 µL
^aXF DMEM 和 RPMI 培养基 pH 7.4 的 pH 值经过预调节，在添加 XF 补充剂后无需调节 pH。请参阅以下制备方法。 ^aSeahorse XF DMEM 培养基 pH 7.4 和 RPMI 培养基 pH 7.4 与 XF24 分析仪不兼容。 ^b 使用替代类型 XF 培养基的制备。 ^b 使用替代类型 XF 培养基的制备。 ^b 使用替代类型 XF 培养基的制备。 ^b 使用替代类型 XF 培养基的制备。 ^b 使用替代类型 XF 培养基的制备。

制备 XF 基础培养基（不含酚红）或 XF RPMI（不含酚红）的基本流程制备 XF DMEM 培养基 pH 7.4 或 XF RPMI 培养基 pH 7.4 的基本流程

所需设备：

37 °C 水浴
经校准的 pH 计
搅拌盘
无菌滤瓶（0.22 µm 滤膜）和盖子
1.0 mol/L NaOH 溶液

安捷伦 Seahorse XF DMEM 培养基 pH 7.4 和 RPMI 培养基 pH 7.4 的设计目的在于：

便捷性：与推荐的安捷伦 Seahorse XF 补充剂共同使用时，无需调节最终 pH 值。
一致性：低浓度 HEPES 缓冲液（5 mmol/L，DMEM；1 mmol/L，RPMI）可获得更为一致的 XF 数据。
定量：使用具有固定缓冲容量的分析培养基，可以定量测定质子释放率 (PER)。

将无菌瓶中适当体积的 XF DMEM 培养基 pH 7.4 或 XF RPMI 培养基 pH 7.4 加热至 37 °C。一般而言，一块板需要用 100 mL。
将无菌瓶中适当体积的 XF 基础培养基（不含酚红）或 XF RPMI（不含酚红）加热至 37 °C。一般而言，一块 XF24 板需要用 100 mL。
添加上文表格中提到的适当体积的 Seahorse XF 补充剂（XF 葡萄糖溶液、XF 丙酮酸盐溶液和 XF L-谷氨酰胺溶液）。
用 1 mol/L NaOH 将 pH 值调节至 7.4。注：添加 NaOH 后 pH 值将很快发生变化，调节 pH 值时应少量缓慢添加。
用 0.2 µm 滤膜对分析培养基进行灭菌。
将最终 XF 分析培养基于 37 °C 下培养，待用。

+ 相关支持材料

洗涤细胞

洗涤贴壁细胞的基本流程

对于 XFp 分析之前至少一天接种的贴壁细胞：

从 CO₂ 培养箱中取出细胞培养迷你微孔板。
在显微镜下观察细胞：

确定细胞健康状况、形态、接种均匀度和纯度（无污染）。
确保细胞贴壁，呈均匀单层分布。
确保背景校正孔中无细胞。

用完整分析培养基清洗 XF 实时 ATP 速率测定培养基清洗一次贴壁细胞：

去除培养基，每孔剩余 20 µL。剩下少量培养基，以免细胞变干。
缓慢加入 200 μL 分析培养基。
在分析之前，将板置于无 CO₂ 的培养箱中，37 °C 下培养 1 小时。

在开始分析之前，用 XF 实时 ATP 速率测定培养基再次洗涤细胞：去除培养基，使剩余 20 µL，并添加新鲜培养基至终体积 180 μL。在显微镜下观察细胞以确保细胞不被干扰或冲走。

去除培养基，每孔剩余 50 µL。剩下少量培养基，以免细胞变干。
缓慢加入 1 mL 分析培养基，然后去除相同体积。
重复步骤 b，去除培养基，保留 50 µL（如步骤 a 所述）。
添加 450 µL 分析培养基（总体积 500 µL）用于 24 孔平台仪器。

去除培养基，每孔剩余 50 µL。剩下少量培养基，以免细胞变干。
缓慢加入 1 mL 分析培养基。
在分析之前，将板置于无 CO₂ 的培养箱中，37 °C 下培养 1 小时。
在开始分析之前，用 XF 实时 ATP 速率测定培养基再次洗涤细胞：去除培养基，使剩余 50 µL，并添加新鲜培养基至终体积 500 μL。在显微镜下观察细胞以确保细胞不被干扰或冲走。

在显微镜下观察分析孔，确保细胞不被冲走。
在分析之前，将板置于无 CO₂ 的培养箱中，37 °C 下培养 1 小时。

接种悬浮细胞的基本流程

对于 Seahorse 细胞培养微孔板，将适当体积的细胞悬液从生长管转移到锥形管中。
计算 Seahorse XFe96 所需的细胞总数时，将每个孔所需的细胞数乘以 100 孔。（例如，150000 细胞/孔 × 100 孔 = 1.5 × 10⁷ 个细胞）。
计算 Seahorse XFp 所需的细胞总数时，将每个孔所需的细胞数乘以 10 孔。（例如，150000 细胞/孔 × 10 孔 = 1.5 × 10⁶ 个细胞）。
在室温下以 200 × g 离心细胞 5 分钟。
离心细胞时，向涂覆 Cell-Tak 的室温 Seahorse XF96 细胞培养板的背景/对照孔移取 50 µL 分析培养基。
离心细胞时，向涂覆 Cell-Tak 的室温 Seahorse XFp 细胞培养板的背景/校正孔（A 和 H）移取 50 µL 分析培养基。
从离心的锥形管中弃去上清液。
将预热分析培养基中的细胞重悬至 50 µL 分析培养基中所需的每孔细胞浓度。（例如，需要 1.5 × 10⁵ 细胞/孔，用适当体积重悬细胞，得到 1.5 × 10⁵ 细胞/50 µL 或 3.0 × 10⁶ 细胞/mL）。
将离心机设置更改为零制动。
将细胞悬液转移到无菌组织培养槽中，或直接从锥形管中移取。
沿每孔的一侧移取 50 µL 细胞悬液，背景/对照孔除外。建议使用多通道移液器。
将迷你微孔板置于 XFp 托板上，以 300 × g 离心 1 分钟，无制动。该托板可容纳 3 个迷你微孔板，适用于标准离心机微孔板适配器。确保离心机转子经适当平衡。
离心后，目测确认细胞在孔底的贴壁情况。
以 200 × g（零制动）离心细胞 1 分钟。确保离心机经适当平衡。
注意不要扰乱底部的细胞，轻轻向每孔中加入 130 µL 分析培养基至所需的初始分析体积 (180 µL)。
在细胞培养孔周围的保护槽中加入无菌水或 PBS，每腔室 100 µL。将 8 通道移液器（如有）设为 50 µL，每个腔室用两个吸头填充保护槽两侧。如果没有多通道移液器，向保护槽的每个腔室分别加入 100 µL 无菌水或 PBS（共 800 µL）。
将板转移至未补充 CO₂ 的培养箱中，37 °C 下培养 25–30 分钟，确保细胞完全贴壁。目测确认多数细胞稳定附着在培养基表面。
沿每个孔的一侧缓慢加入 130 µL 预热分析培养基。注意不要扰乱细胞。
在显微镜下观察细胞，确保细胞贴壁。
将细胞板放回培养箱中培养 15–25 分钟。
15–25 分钟后，细胞板即可用于分析。为获得最佳结果，离心后的总时间不超过 1 小时。

对于 Seahorse XF24 细胞培养微孔板，将适当体积的细胞悬液从生长管转移到锥形管中。
计算 Seahorse XF24 所需的细胞总数时，将每个孔所需的细胞数乘以 25 孔。（例如，150000 细胞/孔 × 25 孔 = 3.75 × 10⁶ 个细胞）。
在室温下以 200 × g 离心细胞 5 分钟。
离心细胞时，向涂覆 Cell-Tak 的室温 Seahorse XF24 细胞培养板的背景/对照孔移取 100 µL 分析培养基。
从离心的锥形管中弃去上清液。
将预热分析培养基中的细胞重悬至 100 µL 分析培养基中所需的每孔细胞浓度。（例如，需要 1.5 × 10⁵ 细胞/孔，用适当体积重悬细胞，得到 1.5 × 10⁵ 细胞/100 µL 或 1.5 × 10⁶ 细胞/mL）。
将离心机设置更改为零制动。
将细胞悬液转移到无菌组织培养槽中，或直接从锥形管中移取。
沿每孔的一侧移取 100 µL 细胞悬液，背景/对照孔除外。安捷伦建议使用多通道移液器。
以 200 × g（零制动）离心细胞 1 分钟。确保离心机经适当平衡。对于 XFp 分析仪用户，安捷伦建议使用安捷伦 Seahorse XFp 托板离心 Seahorse XFp 细胞培养迷你微孔板。如需了解详细信息，请参阅基本流程：在 XFp 细胞培养微孔板中接种悬浮细胞。
将板转移至未补充 CO₂ 的培养箱中，37 °C 下培养 25–30 分钟，确保细胞完全贴壁。目测确认多数细胞稳定附着在培养基表面。
沿每个孔的一侧缓慢加入 400 µL 预热分析培养基。注意不要扰乱细胞。
在显微镜下观察细胞，确保细胞贴壁。
将细胞板放回培养箱中培养 15–25 分钟。
15–25 分钟后，细胞板即可用于分析。为获得最佳结果，离心后的总时间不超过 1 小时。

+ 相关支持材料

组合溶液

安捷伦 Seahorse 分析仪的一个关键特性是它能够在分析过程中对试剂加样并实时查看结果。排出放入仪器前已上样至探针板加药口的溶液，可实现这一过程。

如果使用细胞能量代谢表型分析进行细胞密度和/或 FCCP 滴定的初始细胞表征，则按下表所述制备加样溶液。

如果使用 Seahorse XFp 实时 ATP 速率测定进行细胞密度的初始细胞表征，则按下表所述制备加样溶液。

如果使用 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定进行细胞密度的初始细胞表征，则按下表所述制备加样溶液。

细胞密度滴定分析溶液组合 FCCP 浓度滴定分析溶液组合

从 Seahorse XF 细胞能量代谢表型测试试剂盒中取出一个试剂包，取出两个样品管（寡霉素和 FCCP）。

用移液器将每管的内容物重悬至制备的分析培养基中，体积如下表所述。对管加盖，涡旋混合 1 分钟使化合物溶解。

XF 细胞能量代谢表型测试试剂盒的重悬体积
XF 细胞能量代谢表型测试试剂盒组成	XF 分析培养基体积 (µL)	最终储备液浓度 (µmol/L)
寡霉素	630	100
FCCP	720	100

从 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒中取出一个试剂包，取出两个样品管（寡霉素和鱼藤酮 + 抗霉素 A）。

用移液器将每管的内容物重悬至制备的分析培养基中，体积如下表所述。对管加盖，涡旋混合 1 分钟使化合物溶解。

Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒的重悬体积
化合物	XF 分析培养基体积	最终储备液浓度
寡霉素	420 µL	150 µmol/L
鱼藤酮 + 抗霉素 A	540 µL	50 µmol/L

从 Seahorse XFp 实时 ATP 速率测定试剂盒中取出一个试剂包，取出两个样品管（寡霉素和鱼藤酮/抗霉素 A）。

用移液器将每管的内容物重悬至制备的分析培养基中，体积如下表所述。对管加盖，涡旋混合 1 分钟使化合物溶解。

Seahorse XF 实时 ATP 速率测定试剂盒的重悬体积
化合物	XF 分析培养基体积	最终储备液浓度
寡霉素	168 µL	75 µmol/L
鱼藤酮 + 抗霉素 A	216 µL	25 µmol/L

如下表所述，使用 15 mL 锥形管，通过合并适当体积的 XF 分析培养基、寡霉素储备液和 FCCP 储备液制备 3.0 mL 加样溶液。

XF 细胞能量代谢表型测试试剂盒的稀释体积 — XFe24/XF24 细胞接种密度滴定
孔内的最终 FCCP 浓度	分析培养基体积 (µL)	寡霉素储备液体积 (µmol/L)	FCCP 储备液体积 (µL)	10X 最终寡霉素（加药口）浓度 (µmol/L)	10X 最终 FCCP（加药口）浓度 (µmol/L)
0.25	875	100	25	10	2.5
0.5	850	100	50	10	5.0
1.0	800	100	100	10	10
2.0	700	100	200	10	20

如下表所述，通过合并适当体积的 XF 分析培养基、寡霉素储备液和鱼藤酮/抗霉素 A 储备液制备 3.0 mL 每种加样溶液。

XF 实时 ATP 速率测定试剂盒的稀释体积 — 细胞表征
加药口和化合物	储备液体积	XF 分析培养基体积	10X [加药口]	[最终的孔]
加药口 A 寡霉素	300 µL	2700 µL	15 µmol/L	1.5 µmol/L
加药口 B 鱼藤酮 + 抗霉素 A	300 µL	2700 µL	5 µmol/L	0.5 µmol/L

如下表所述，通过合并适当体积的 XF 分析培养基、寡霉素储备液和鱼藤酮/抗霉素 A 储备液制备 300 µL 每种加样溶液。

XF 实时 ATP 速率测定试剂盒的稀释体积 — 细胞表征
加药口和化合物	储备液体积	XF 分析培养基体积	10X [加药口]	[最终的孔]
加药口 A 寡霉素	60 µL	240 µL	15 µmol/L	1.5 µmol/L
加药口 B 鱼藤酮 + 抗霉素 A	60 µL	240 µL	5 µmol/L	0.5 µmol/L

如果进行不同类型的 XFp 分析，查阅相应 XFp 试剂盒用户指南了解相应加样溶液制备说明。

+ 相关支持材料

加样溶液上样

如果使用细胞能量代谢表型分析进行初始细胞表征（细胞密度和 FCCP 浓度滴定分析），请按照以下说明和表格进行探针板加药口加样。如果使用 Seahorse XF 实时 ATP 速率测定进行初始细胞表征（细胞密度分析），请按照以下说明和表格进行探针板加药口加样。

注意：对于这些分析设计，仅使用 A 和 B 加药口。

传感器探针板加药口布局

XF24 传感器探针板加药口布局

从无 CO₂ 培养箱中取出水化探针板。
定位安捷伦 Seahorse XF 分析探针板。将行标签（标有字母 A–H）放在左边。三角形缺口在左下角。
定位安捷伦 Seahorse XF 分析探针板。将行标签（标有字母 A–D）放在左边。三角形缺口在左下角。
定位安捷伦 Seahorse XFp 分析探针板。将孔标签（标有字母 A–H）放在左边。三角形缺口在左下角。
XFp 传感器探针板加药口布局
将 A/D 上样导轨平面置于分析探针板顶部。定位上样导轨，使字母 A 位于左上角。上样时用指尖捏住上样导轨的外缘使之保持稳定，从而使移液吸头不会移动上样导轨。
使用 10–100 µL 多通道移液器确保将吸头牢固安装在移液器上。将移液吸头（填充加样化合物）放入上样导轨的目标列中，使吸头略微倾斜一定角度。在无阻力的前提下，将吸头尽可能插入孔中并排出化合物。请勿用强力将吸头完全插入孔中。
使用量程为 100 或 200 µL 的（多通道）移液器确保将吸头牢固安装在移液器上，将移液吸头（填充加样化合物）放入目标加药口中，使吸头略微倾斜一定角度 (< 5°)。请勿用强力将吸头完全插入孔中。
使吸头保持 45° 角。将吸头一半放入加药口，吸头的斜角抵在加药口的另一面。
请勿将吸头完全插入加药口底部，否则可能会导致化合物通过加药口泄漏。
根据如下所示的板/组布局，缓慢地向加药口排出 20 µL 的适当加样溶液。在整个操作过程中，小心从加药口移走吸头，使上样导轨保持稳定。避免产生气泡。请勿敲击探针板的任何部位试图缩小气泡。敲击可能使溶液从加药口泄漏。
按所进行的分析，根据如下所示的板/组布局，缓慢地向加药口排出 55 µL 适当加样溶液。小心从加药口移走吸头。避免产生气泡，请勿敲击探针板的任何部位试图缩小气泡。敲击可能使溶液从加药口泄漏。
根据如下所示的板/组布局，缓慢地向加药口排出 20 µL 适当上样溶液。在整个操作过程中，小心从加药口移走吸头，使探针板保持稳定。避免产生气泡。请勿敲击探针板的任何部位试图缩小气泡。敲击可能使溶液从加药口泄漏。
取下 A/D 加药口上样导轨，并换上 B/C 加药口上样导轨，使“B”在左上角。使用 22 µL 加样溶液重复上述步骤为加药口 B 上样。
使用 62 µL 加样溶液重复上述步骤为加药口 B 上样。
使用 22 µL 加样溶液重复上述步骤为加药口 B 上样。
目测加药口加样是否均匀。液体应在加药口中，确保探针板顶端无残余液滴。

用于细胞密度滴定分析的加药口加样

XF 实时 ATP 速率测定试剂盒的加药口和体积 — 细胞表征
加药口和化合物	体积	10X [加药口]	[最终的孔]
加药口 A 寡霉素	55 µL	15 µmol/L	1.5 µmol/L
加药口 B 鱼藤酮 + 抗霉素 A	62 µL	5 µmol/L	0.5 µmol/L

孔内最终浓度 (µmol/L)	FCCP 组	孔	加药口/体积 (µL)
寡霉素/FCCP 1.0/1.0	1.0 µmol/L	A1–D6（所有）	A/55

用于 FCCP 浓度滴定分析的加药口加样

XF 实时 ATP 速率测定试剂盒的加药口和体积细胞表征
加药口和化合物	体积	10X [加药口]	[最终的孔]
加药口 A 寡霉素	20 µL	15 µmol/L	1.5 µmol/L
加药口 B 鱼藤酮 + 抗霉素 A	22 µL	5 µmol/L	0.5 µmol/L

如果进行不同类型的 XF 分析，请参阅适当 XF 试剂盒用户指南和说明，了解多个加样溶液的适当上样方法。

定位安捷伦 Seahorse XF 分析探针板。将行标签（标有字母 A–H）放在左边。三角形缺口在左下角。
定位安捷伦 Seahorse XF 分析探针板。将行标签（标有字母 A–D）放在左边。三角形缺口在左下角。
定位安捷伦 Seahorse XF 分析探针板。将行标签（标有字母 A–D）放在左边。三角形缺口在左下角。
将 A/D 上样导轨平面置于分析探针板顶部。定位上样导轨，使字母 A 位于左上角。上样时用指尖捏住上样导轨的外缘使之保持稳定，从而使移液吸头不会移动上样导轨。
使用量程为 10–100 µL 的多通道移液器确保将吸头牢固安装在移液器上。将移液吸头（填充加样化合物）放入上样导轨的目标列中，使吸头略微倾斜一定角度。在无阻力的前提下，将吸头尽可能插入孔中并排出化合物。请勿用强力将吸头完全插入孔中。
使用多通道移液器确保吸头牢固安装在移液器上。
使吸头保持 45° 角。将吸头一半放入加药口，吸头的斜角抵在加药口的另一面。
请勿将吸头完全插入加药口底部，否则可能会导致化合物通过加药口泄漏。
缓慢向加药口中排出化合物。小心从加药口移走吸头，在整个操作过程中，使上样导轨保持稳定。
避免产生气泡，请勿敲击探针板的任何部位试图缩小气泡。敲击可能使溶液从加药口泄漏。
切换到 B/C 上样导轨。将字母 B 定位在左上角。使用合适的上样导轨，对 B、C、D 加药口重复步骤 3–5 所述的上样过程。取下并丢弃上样导轨。
对 B、C、D 加药口重复上述步骤的上样过程。
目测加药口加样是否均匀。液体应在加药口中，确保探针板顶端无残余液滴。

加样基本信息和指南

推荐加样体积为 20–30 µL。
推荐加样体积为 50–100 µL。
推荐将加样溶液稀释 10 倍后加样，从 180 µL 分析培养基的微孔板孔体积开始：
- 加药口 A：20 µL
- 加药口 B：22 µL
- 加药口 B：25 µL
- 加药口 B：28 µL
推荐将加样溶液稀释 10 倍后加样，从 500 µL 分析培养基的微孔板孔体积开始：
- 加药口 A：55 µL
- 加药口 B：62 µL
- 加药口 C：69 µL
- 加药口 D：75 µL
根据分析设计选择加药口的组成、顺序和数量。
探针板上样时不建议使用自动移液器，因为可能使加样溶液从加药口泄漏。

+ 相关支持材料

+ 运行 XF 分析

本部分重点介绍使用 XF 细胞能量代谢表型测试在分析仪上进行细胞初始表征。

本部分重点介绍使用 XF 实时 ATP 速率测定在分析仪上进行细胞初始表征。

重要事项 — 在开始 XF 分析之前

目测加药口加样是否均匀。液体应在加药口中，确保传感器探针板顶端无残余液滴。
在显微镜下观察细胞：
- 确定细胞健康状况、形态、接种均匀度和纯度（无污染）。
- 对于贴壁细胞，确保细胞贴壁形成均匀单层，洗涤步骤中不会被冲走。
- 对于悬浮细胞，确保细胞在离心、洗涤和培养后稳定附着。
- 确保背景孔不含细胞。

运行分析的流程

填充所有目标加药口后，将探针板和工具板转移到分析仪上，并开始探针板校准。
重要！在开始校准前，应确保：
- 传感器探针板正确安装在工具板上。
- 取下传感器探针板的盖子。
- 传感器探针板在工具板上的位置经过正确定位（定向）。
探针板校准完成后，按照软件提示将工具板更换为细胞培养板并开始 XF 分析。
重要！在加载细胞板前，应确保：
- 取下细胞板的盖子。
- 细胞板在托盘上的位置经过正确定位（定向）。
分析完成后将弹出传感器探针板和细胞培养板，如有需要可以将其保存，待后续分析（如细胞计数归一化）。
将 XFd 结果文件保存或传输到共享网络驱动器或 USB 驱动器上，并使用您电脑上的 Wave Desktop 软件打开用于分析数据分析。

进入分析仪，确保 XFe 分析仪通电并连接到 XFe 控制器（计算机）。您可以在 Wave Controller 软件左下角的小组件面板中确认仪器连接状态。
从“模板”视图中双击打开所需的分析模板文件。如果您的分析模板未显示在“模板”视图中，使用共享网络驱动器或 USB 闪存驱动器传输模板。
检查组定义、板布局和仪器方案后，点击开始运行。
输入结果文件的保存位置后（完成分析后），XFe 分析仪上的托盘门将打开。
重要！在开始校准前，应确保：
- 传感器探针板正确安装在工具板上。
- 取下传感器探针板的盖子。
- 传感器探针板在工具板上的位置经过正确定位（定向）。
提示时，将传感器探针板（水化并上样化合物）和工具板放在托盘上。
点击准备完毕启动传感器探针板校准。
完成校准大约需要 10–20 分钟（37 °C 下的分析）。对于在 37 °C 以外温度条件下的 XF 分析，需要额外加 30 分钟进行预校准，确保得到准确的数据。

传感器探针板校准完成后，Wave Controller 将显示加载细胞板对话框。
单击打开托盘弹出工具板，并将细胞板加载到托盘上。运行该步骤时，传感器探针板仍然在 XFe 分析仪中。
重要！在加载细胞板前，应确保：
- 取下细胞板的盖子。
- 细胞板在托盘上的位置经过正确定位（定向）。
在将细胞板加载到托盘后，点击加载细胞板开始平衡。
在完成平衡后，分析将自动开始采集基线测量值（如仪器方案中所述）。
仪器方案的最终测量命令完成后，Wave Controller 软件将显示下载传感器探针板对话框。
准备好弹出传感器探针板和细胞板时，单击弹出。如有需要可以将其保存，待后续分析（如细胞计数归一化）。
取出传感器探针板和细胞板后，将显示分析完成对话框。
单击查看结果可以快速打开分析结果文件，或单击 Wave 主页返回“模板”视图并开始另一个 XFe 分析。
将分析结果文件保存或传输到共享网络驱动器或 USB 驱动器上，并使用您电脑上的 Wave Desktop 软件打开用于数据分析。

参阅 Wave 用户指南第 2 章，了解 XFe 分析仪分析操作的完整细节，包括如何在分析中添加/删除测量值、XFe 分析在 37 °C 以外温度下的环境条件，等等。

在 XFp 分析仪主屏幕上，触摸开始显示可用的分析模板列表。
如果所需模板未在“本地”选项卡列出，则使用共享网络驱动器或 USB 闪存驱动器打开或传输模板文件。
触摸打开分析模板查看模板设计：
1. 组定义 — 触摸组名显示所选组的加样策略、预处理和细胞类型信息。XFp 分析仪软件不允许修改组定义，修改必须使用 Wave Desktop 软件。
2. 板布局 — 改变分配到组的某个孔，先触摸组名称，然后触摸板布局上的孔。
触摸向右的箭头（右下角）查看或编辑仪器方案。
1. 如需在仪器方案中添加或删除测量周期，首先触摸“实验步骤”，然后使用加/减按钮调节测量周期。
再次触摸向右的箭头（右下角），显示“查看和运行”界面。在按下开始运行之前，您可以进行如下操作：
1. 按分析名称旁的编辑，自定义分析结果文件名称。
2. 按备注旁的编辑，添加与分析相关的自定义备注。
3. 按邮件通知旁的编辑，将用户交互通知收件人（例如用细胞板替换工具板），并在分析完成后自动发送分析结果文件。该功能需要 XFp 分析仪器联网。
在准备开始 XF 分析时，单击开始分析。
提示时，将传感器探针板（水化并上样化合物）和工具板放在托盘上。
重要！在开始校准前，应确保：
- 传感器探针板正确安装在工具板上。
- 取下传感器探针板的盖子。
- 传感器探针板在工具板上的位置经过正确定位（定向）。
校准完成后，XFp 分析仪托盘将打开并露出工具板。取下工具板，将细胞板加载到托盘上。
重要！在加载细胞板前，应确保：
- 取下细胞板的盖子。
- 细胞板在托盘上的位置经过正确定位（定向）。
在将细胞板放在托盘上之后，触摸继续开始平衡。在完成平衡后，分析将自动开始采集基线测量值（如仪器方案中所述）。
在仪器方案的最终测量命令完成后，将出现取下板和探针板对话框。单击继续弹出传感器探针板和细胞板。如有需要可以将其保存，待后续分析（如细胞计数归一化）。
将分析结果文件保存或传输到共享网络驱动器或 USB 驱动器上，并使用您电脑上的 Wave Desktop 软件打开用于数据分析。

+ 相关支持材料

+ 分析 XF 分析结果

本部分重点介绍使用 Wave Desktop 和报告生成器软件查看并分析检测结果数据。

Wave Desktop 是用于任意 XF、XFe 和 XFp 分析仪生成结果文件的数据分析软件。使用 Wave Desktop 的灵活分析视图、内置报告工具和其他强大的分析功能，可以将复杂的细胞代谢数据转化为可发布结果。

XF 报告生成器是 Microsoft Excel 宏文件，可自动计算每个 Seahorse XF 分析试剂盒的参数，并将结果数据呈现在一页纸的定制总结报告中。

选择以下主题了解更多信息：

电脑性能指标与
兼容性

数据类型

数据显示
选项

分析视图

XF 报告
生成器

电脑性能指标与兼容性

Wave Desktop 是一种适用于所有 Seahorse 分析仪的分析设计和数据分析软件，支持：

对所有 Seahorse 分析仪（XFe96、XFe24、XFp、XF96 和 XF24）的数据文件进行分析。
为 XFe96、XFe24 和 XFp 分析仪创建并定制分析模板。
将数据导出为 (1) Microsoft Excel、(2) GraphPad Prism 或 (3) XF 报告生成器。
支持用于 Windows 和 Macintosh 电脑的 Microsoft Excel（32 位和 64 位）。

建议更新到 Wave Desktop 软件最新版本。Wave Desktop 软件的最新版本是 2.6 版（2018 年 3 月）。Wave Desktop 软件可安装在采用 Windows 7 或更高版本操作系统的任意电脑上。

以下是 Wave Desktop 2.6 软件的电脑性能指标和兼容性详情：

计算机	性能指标
Windows 电脑	操作系统：Windows 7、8.1 和 10
	处理器：Intel Core i3（或更高配置）
	硬盘空间：175 GB
	系统内存 (RAM)：4 GB（最小*）
	屏幕分辨率：1280 × 800（最小）
	支持的 Excel 版本：2010、2013 和 2016
Macintosh 电脑（需要使用虚拟机）	操作系统：Mac OSx 10.11 或更高
	虚拟机：Parallels 12 与 Windows 7、8.1、10
	处理器：Intel Core i3（或更高配置）
	硬盘空间：175 GB
	系统内存 (RAM)：4 GB（最小*）
	屏幕分辨率：1280 × 800（最小）
	支持的 Excel 版本：2011 和 2016

* 推荐使用 8 GB（或更大）系统内存 (RAM)，以获得最佳软件体验。

+ 相关支持材料

数据类型

细胞耗氧量（呼吸）和质子分泌（糖酵解）导致溶解氧和游离质子的浓度发生快速且易测量的变化。安捷伦 Seahorse XF 分析仪可通过分离微孔板中单层细胞上极小体积（约 2 µL）的培养基，实时测量溶解氧和自由质子浓度，然后分别计算出 OCR 和 ECAR。

利用 Wave Desktop 软件，您可以轻松获得并查看以下数据：

XF 分析仪的主要输出是速率数据。

耗氧率 (OCR)：每孔耗氧量的定量测量值，是线粒体呼吸的一个指标，报告为皮摩尔/分钟 (pmol/min) 相对时间的关系。
显示在速率模式（右）下的耗氧率 (OCR) 数据。
细胞外酸化率 (ECAR)：细胞外培养基中质子释放的定性测量值，报告为 pH 千分之一/分钟 (mpH/min) 相对时间的关系。
显示在速率模式（右）下的细胞外酸化率 (ECAR) 数据。
质子释放率 (PER)：细胞外酸化的定量指标，用于描述培养基缓冲能力和板几何形状。报告为皮摩尔/分钟 (pmol/min) 相对时间的关系。仅可获得运行后分析结果，无法在分析运行期间得到结果。

参阅 Wave 用户指南第 3 章，了解关于 Wave 软件可用数据类型的更多信息。

水平数据用于计算速率数据，也可用于诊断目的。

氧浓度 (mmHg)：细胞（或其他生物材料）在测量过程中消耗氧气时，氧张力将降低。这一氧张力的降低可用于计算耗氧率 (OCR)。您可以利用 Y1 下拉菜单中的概览分析视图查看氧张力水平数据。
水平模式下（右）以 mmHg 相对时间变化显示的氧张力 (O₂) 数据。
质子浓度 (mpH)：细胞（或其他生物材料）在测量过程中产生质子时，质子浓度将增加。测量整个 XF 分析过程中微室内的游离质子浓度，并作为细胞外酸化率 (ECAR) 进行计算。您可以使用 Y1 下拉菜单中的“概览”分析视图查看 mpH 水平数据。
显示在水平模式（右）下的质子浓度 (mpH) 数据

+ 相关支持材料

数据显示选项

Wave 提供了一组查看并解析分析结果数据的标准图形选项。Wave 可根据所选的分析视图类型自动计算，并将结果数据以如下方式图形化：

动力学图

动力学图是显示 XF 分析仪速率数据的最常用方法。动力学图的 y 轴表示速率，x 轴表示时间。在分析过程中，采集的数据将实时绘制成动力学图。动力学图可以在 Wave 软件的快速视图和概览分析视图中找到。

能量图

另一种绘制 XF 结果数据的常见方法是能量图（散点图），其中 y 轴通常表示耗氧量 (OCR)，x 轴常表示酸化数据（ECAR 或 PER）。使用“测量”下拉菜单选择速率测量值，以显示每组的能量图。使用“速率”下拉菜单将 x 轴的速率改为 PER。可以在快速视图和 OCR 与 ECAR 分析视图中找到能量图图形选项。

板布局

板布局很好地显示了每个分析孔选定速率测量值的速率数据。在分析过程中，板布局通常显示在 Wave 的右上角，也可在快速视图、概览以及 OCR 与 ECAR 分析视图中找到。快速视图中有一个显示板布局的按钮，默认为隐藏状态。

快速视图和 OCR 与 ECAR 分析视图中的板布局显示了两种速率：耗氧率（OCR — 顶部）和酸化数据（ECAR 或 PER — 底部）。概览分析视图中的板布局显示了一种速率 — OCR、ECAR 或 PER。

打开一个新的分析视图时，板布局默认显示速率测量值 1 的数据。在分析过程中，可使用“速率”下拉菜单显示另一个速率测量值的数据。

柱状图

柱状图仅在概览分析视图（板布局下方）中可见，显示的是所选测量值的每组平均速率。使用显示下拉菜单改变从组（平均）到孔（单个孔）模式的速率显示。

柱状图可用于确定异常值、最佳 FCCP 浓度、最佳细胞接种密度，或在测量数据绘制成动力学图或散点图时可能不明显的其他趋势。

组列表

组列表是动力学图或散点图中绘制数据的图例。

使用组列表可以：

双击组名隐藏或显示各组的图形数据。
勾选组列表右上角的详情框可显示组统计数据。统计数据显示为所选速率测量值的平均值和误差。选择不同的速率测量值可显示该速率的组统计数据。
板布局中关闭的分析孔不包括在计算的组统计数据中。
隐藏某个组时，该组的平均值和标准偏差为：平均值 0.00；标准偏差 0:00。

参阅 Wave 用户指南第 3 章，了解关于 Wave 软件可用数据类型的更多信息。

+ 相关支持材料

分析视图

4 个可定制的分析视图可添加到 Wave Desktop 的分析结果文件中。使用顶级功能区菜单中的添加视图按钮，将每个分析视图多次添加到一个分析结果文件中。

快速视图

快速视图是打开一个新的分析结果文件时显示的默认分析视图。快速视图同时显示 OCR 与时间的动力学图、ECAR 与时间的动力学图，以及 OCR 与 ECAR 的能量图。

概述

概览显示速率（OCR、ECAR、PER 或 PPR）与时间的动力学图。y 轴显示所选速率，x 轴显示时间。勾选动力学图下组列表中的详情框可显示每个测量值的组统计数据（平均速率与误差）。概览是 Wave 软件中用于常规分析功能最通用的分析视图。如需显示概览，单击添加视图并从视图列表中选择概览。

技巧：重复添加视图 > 概览过程可添加多个“概览”分析视图。这为显示特定组、响应或组之间对比的数据结果呈现方式定制提供了更大的灵活性。

OCR 与 ECAR

OCR 与 ECAR 视图显示了一个能量图，其中 y 轴为 OCR（默认），x 轴为 ECAR。利用“速率”下拉菜单可将 x 轴显示的速率更改为 PER 或 PPR。y 轴通常显示 OCR，无法修改。如需显示 OCR 与 ECAR，单击添加视图并从视图列表中选择 OCR 与 ECAR。

数据

数据视图包含与分析结果文件相关的所有数据，分为 7 个选项卡：

组数据：每组的平均速率数据（OCR、ECAR、PER 或 PPR）和误差，按测量号码排序。
速率：按测量号码排序的单孔速率数据（OCR、ECAR、PER 或 PPR）。不显示误差值。
水平数据：按测量号码排序的单孔水平数据（O₂ 和 pH）。
原始数据：原始测量数据，包括每次测量记录的 O₂ 和 pH 光发射值、参考值、孔和环境温度。该选项卡最常用于技术支持，而非常规数据分析。
校准：每孔的 O₂ 和 pH 校准结果。
校准视图：每个分析孔的 O₂ 和 pH 校准结果，显示为板布局。
事件记录：分析仪序列号、软件版本、板与条码批号等分析信息以及分析期间的其他设置。还提供了 XF 分析时使用的方案命令可排序表格，包括命令名称、时间和结果。

如需显示数据视图，单击添加视图并从视图列表中选择数据。打开数据视图时，默认显示组数据选项卡。

参阅 Wave 用户指南第 3 章，获取关于每个分析视图的详细信息，包括将数据重新计算为基线百分比、将速率数据归一化为生物学参数（即细胞数量）、在板布局上标记分析孔，以及其他关键分析功能和特征。

+ 相关支持材料

XF 报告生成器

安捷伦 Seahorse XF 报告生成器是 Microsoft Excel 宏文件，可自动计算每个 Seahorse XF 分析试剂盒的参数，并将结果数据呈现在一页纸的定制总结报告中。

Wave 可一键式直接将结果数据导出至 XF 报告生成器，Wave 中对结果数据的任意修改（如排除的分析孔或归一化速率数据）都将包含在导出和分析的报告生成器 Excel 文件中。单击顶级功能区菜单中的导出选项，可显示可用的 XF 报告生成器导出选项列表。

为何使用 XF 报告生成器？

可实现更有效、更一致的数据分析 — 将原始动力学数据转换为易于解析的结果，并避免重复的手动计算和数据简化。
几秒内总结出 XF 结果数据 — 以有序、可定制、易于理解的报告形式呈现数据。
可扩展以满足您的分析需求 — 使用多文件 XF 报告生成器一次性导入并分析最多 5 个重复结果文件。
协作更简单 — 无需任何特殊软件程序或许可，即可查看并重新分析报告生成器中的结果数据。
支持以下分析：

在 Seahorse XFe、XF 和 XFp 分析仪上生成的数据文件。
Windows 电脑上的 Microsoft Excel 2010、2013 和 2016。
Apple 计算机上的 Mac 2011 和 2016 Excel。

XF 报告生成器 — 下载页面	单文件分析	多文件分析
Seahorse XF 细胞能量代谢表型测试	单文件用户指南	多文件用户指南
Seahorse XF 细胞线粒体压力测试	单文件用户指南	多文件用户指南
Seahorse XF 实时 ATP 速率测定	单文件用户指南	不可用
Seahorse XF 糖酵解速率测定	单文件用户指南	多文件用户指南
Seahorse XF 线粒体底物分析	单文件用户指南	不可用
Seahorse XF 糖酵解压力测试	单文件用户指南	不可用

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全球技术支持

电子邮件：cellanalysis.support@agilent.com

美国与加拿大
1-800-227-9770；选 3 再选 8

欧洲
英国：0800 096 7632
德国：0800 180 66 78
荷兰：0800 022 7243
欧盟其他国家/地区：+45 3136 9878

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仅限研究使用。不可用于诊断目的。