Access Agilent 电子期刊，2016 年 5 月

Agilent AdvanceBio SEC 可以为各种仪器提供最佳性能

Linda Lloyd，安捷伦生物色谱柱产品经理

安捷伦的新型体积排阻色谱 AdvanceBio SEC 专为实现基于体积的单克隆抗体 (mAb) 等治疗性蛋白的快速准确表征而设计。聚集体或降解物的存在对安全性具有显著影响，并且会导致免疫应答 [1]。因此，关于治疗性蛋白的质量控制法规（如 ICH(Q6B)）明确指出必须分离并定量目标产品中的聚集体。在开发新型治疗性蛋白的过程中，必须确定所有生产阶段中发生聚集的可能性以及聚集体的量。为支持这些开发活动，可能需要在不同实验室中使用不同的液相色谱系统进行分析。因此，方法必须在一系列液相色谱仪和实验室之间提供准确、可重现的数据。体积排阻色谱法 (SEC) 能够根据溶液中溶质的尺寸将溶质分离，是定量分析蛋白质聚集体的首选方法。

安捷伦的突破性创新

新型 Agilent AdvanceBio SEC 生物色谱柱填充有独特的 2.7 µm 低结合性聚合物涂层硅胶颗粒固定相，其独特的制造方法控制了孔径、孔结构和孔容。此项技术具有最小的非特异性相互作用，可确保蛋白质峰尖锐且分离度良好。如本视频与之前的文章所详细介绍，AdvancedBio SEC 生物色谱柱克服了许多与 SEC 相关的传统难题，消除了不确定性，并使您能够快速可靠地分离蛋白质聚集体和降解产物。

图 1. 不同 HPLC 仪器进行蛋白质分离的直观示例，蓝色迹线为 BioRad 蛋白质混标，红色迹线为 γ-球蛋白。以上样品为不同实验室的不同批次蛋白质

AdvancedBio SEC 色谱柱实现了仪器兼容性的改进

尽管推荐用于 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统，但我们的 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱专为使所有仪器均实现最佳性能而开发。高度均一的 2.7 µm 粒径填料提供优异的柱效，可在适合任意 HPLC 系统的运行压力下实现最高的蛋白质回收率，其中包括从 400 bar 传统仪器到 1200 bar UHPLC 仪器。图 1 中的色谱图显示了这一广泛的兼容性，这些色谱图在不同实验室中使用不同色谱柱和不同批次的蛋白质生成。这种对全套液相色谱的兼容性意味着您无需再等待 UHPLC 系统准备好生成数据，因为您可以使用任何一台可用的液相色谱。

确保仪器与仪器之间，以及实验室与实验室之间分析结果的一致性对高效方法转移至关重要。安捷伦技术概述 5991-6302CHCN 重点介绍了不受地点与操作者限制，在老式 400 bar 仪器乃至可进行 UHPLC 分析的现代仪器上获得了相当结果。内容中包括选择正确的色谱柱内径。Agilent AdvanceBio SEC 生物色谱柱提供两种内径，4.6 mm 和 7.8 mm。使用内径不同的色谱柱时需调节流速以保持一致的线速度和进样量。例如，对于样品量有限的分析，4.6 mm 色谱柱可采用更低的进样量。然而，7.8 mm 色谱柱采用较大的进样量，在需要高稳定性并使用光散射检测器表征聚集体时更具优势。

温度是一个经常被忽略的因素，因为大多数分离在室温下进行。但是，温度可能随时间、季节或加热和制冷设备而变化。进行水相分离时，反压将随温度发生明显变化，这也可能会对聚集水平造成影响。为确保方法的高效转移，在分离时应当将色谱柱放置在恒温柱温箱中，而样品同样置于恒温环境中。

根据等度分离机制，仪器之间保留时间存在差异的最可能原因是流速不准确（例如由于泵磨损）、系统扩散体积的差异、柱外死体积的差异、毛细管长度或直径的变化或样品定量环尺寸的变化。为确定除色谱柱以外应当优化的因素，可运行 Agilent AdvanceBio SEC 蛋白质标准品等蛋白质混标，计算峰形和柱效，并与预期值进行比较。

如需了解本研究的全部详情，请参阅技术概述 5991-6302CHCN。查看技术简报 5991-6474CHCN 了解 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱在生物药物分析领域的优势，如需了解更多内容，请阅读产品样本 5991-6212CHCN 或应用简报 5991-6424CHCN。

Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱拥有的突破性技术开发用于在不受仪器、地点与操作者限制的前提下实现最佳性能。这种重现性能够帮助您快速可靠地分离蛋白质聚集体，从而消除不确定性。Agilent Advance Bio SEC 色谱柱能够在色谱柱间、批次间乃至实验室间提供可重现的结果。

安捷伦为您提供各种创新的生物制药解决方案

AdvanceBio SEC 是安捷伦创新的 AdvanceBio 系列 HPLC 色谱柱中的最新产品。这些色谱柱可以很轻松地融入您的工作流程中，并且为您提供各种孔径和规格选择。安捷伦专门为蛋白质、抗体、偶合物、新生物实体和生物药物的完整表征提供一致、出色的性能。了解我们的生物分析解决方案和液相色谱生物柱系列，然后联系安捷伦客户服务中心，了解我们的解决方案如何能够加快您的工作流程并缩短新型生物治疗药物的上市时间。

参考文献

U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration. Guidance for Industry
Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products. August 2014

仅限研究使用。不可用于诊断目的。

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