Access Agilent 电子期刊，2013 年 9 月

使用 Agilent RapidFire 高通量质谱系统进行血清中 6 种抗癫痫药物的超快速分析

作者：Mohamed Youssef
Agilent RapidFire 应用科学家

Vaughn P. Miller
安捷伦 RapidFire 应用经理

传统的抗癫痫药物临床研究使用 HPLC、LC/MS/MS 以及其他技术进行定量分析。研究人员对更高通量和更快周转时间的需求，使人们对这类传统技术的要求日益严格。为应对通量问题，Agilent RapidFire 高通量质谱系统可实现超快速固相萃取 (SPE) MS/MS 分析，每个样品的分析时间不到 15 s。

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图 1. 用于验证方法通量（每分钟多于四个样品）的 6 种抗癫痫药物的化学结构

如图 1 所示，安捷伦近来开发了一种可同时分析人类血清中六种抗癫痫药物 (AED) 的超快速 SPE/MS/MS 方法。与 LC/MS/MS 和 HPLC 分析相比，样品分析周期更短，而分析结果相近。

速度惊人，结果准确

在经过简单的蛋白质沉淀后，直接稀释上样进行 RapidFire SPE/MS/MS 分析，这种方法可准确和精确地测量人类血清中的目标分析物，线性范围为 1 至 100 µg/mL。我们在 RapidFire SPE/MS/MS 系统上进行样品分析，每个样品的分析时间可低至 14 s。该超快速方法的速度和准确度可用于高效的定量工作流程。

Agilent RapidFire/MS/MS 系统包括如下模块：Agilent RapidFire 300、Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统，使用配备定性分析 (B.04.00) 和定量分析 (B.04.00) 组件的 Agilent MassHunter 工作站三重四极杆采集软件 (B.04.01)，以及 RapidFire 采集软件。

在所有实验中，我们同时监测了 6 种 AED 和内标的定性和定量离子。Agilent MassHunter 工作站定量软件将自动计算定性离子比值。安捷伦应用简报 5991-2292EN 中列出了 RapidFire/MS/MS 的条件。

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图 2. 6 种 AED 目标化合物的典型校准曲线，进样间隔仅为 14 秒

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图 3. 6 种 AED 分析物的典型校正曲线，线性范围为 1 至 100 mcg/mL。黑色圆圈代表校准物，蓝色三角形代表 QC 标准品

简单快速的样品前处理

首先将 AED 添加到不含药物成分的人血清中，然后使用甲醇和乙腈沉淀蛋白质。使用含内标物的水将样品稀释 50 倍后，采用 RapidFire/MS/MS 系统和反相 C18 萃取柱进行样品分析（图 2）。

高质量定量测量

为评估交叉污染，我们在运行校正曲线最高浓度样品后，立即进行基质空白样品的分析，结果表明所有目标分析物均不存在明显的交叉污染。由各种浓度 AED 加标血清样品生成的标准曲线在测量范围 (1–100 mcg/mL) 内均具有良好的线性，并且 R2 值大于 0.995（图 3）。

连续多天运行 AED 的 QC 标准品，测定日内和日间的精密度和准确度。在测量范围内，浓度准确度偏差小于 7%，变异系数值也均小于 7%。

连续运行超过 2000 次 6 种 AED 加标血清样品，评估方法的重复性。6 种目标分析物的仪器响应均很稳定，变异系数在 1.6% - 7% 范围内。上述结果表明 RapidFire 系统具有极佳的稳定性、SPE 柱使用寿命长以及目标分析物的定量结果一致。

快速、准确、精确的方法

该方法的处理程序包括蛋白质沉淀、稀释后直接上样的样品前处理步骤，然后在 Agilent RapidFire/MS/MS 系统上进行快速分析，结果表明它是快速筛查和定量人类血清中抗癫痫药物的非常有效的方法。使用此简单方案可以快速、准确、精确地测量血清样品中的 6 种药物。

每个样品的分析时间仅为 14 s，每小时可分析的样品数量大于 250 个，是名副其实的高通量分析方法。该方法可提供与传统 LC/MS/MS 一致的分析结果，而分析速度和效率可提高 10 倍以上。

效率更高，成本更低

我们最初与一位非常专业的客户合作开发该应用。该客户已经完成了类似方法的验证，并正在使用 RapidFire/MS/MS 进行日常的临床样品分析。对于临床研究实验室而言，RapidFire/MS 的关键优势在于：

可获得与传统 LC/MS/MS 分析一致的结果
基于 MS 的分析时间至少缩减至原来的 1/10
Shorter turnaround times for delivery 个结果，共 analytical 个
实验室年运行成本可至少节省 200000 美元

如果您需要一种高效的筛查和定量血浆中 AED 的方法，请参见完整版应用简报5991-2292EN。然后观看视频，了解 Agilent RapidFire 技术如何在先导化合物发现、代谢和临床研究应用中减少分析时间并节省成本。

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图 1.

用于验证方法通量（每分钟多于四个样品）的 6 种抗癫痫药物的化学结构

图 2.

6 种 AED 目标化合物的典型校准曲线，进样间隔仅为 14 秒

图 3.

6 种目标化合物的典型校正曲线，线性范围为 1 至 100 mcg/mL。黑色圆圈代表校准物，蓝色三角形代表 QC 标准品