Access Agilent 电子期刊，2014 年 10 月
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Agilent 7010 三重四极杆气质联用系统使 17β-雌二醇在 EI 模式可以达到低至飞克级的进样浓度
作者：Melissa Churley
安捷伦高级应用科学家
生物体液和在环境中的雌激素和雄激素类固醇激素水平的监测，需要高灵敏、可重现的方法。在负化学电离 (NCI) 的模式下，Agilent 7000 三重四极杆气质联用系统可对血清中 ≤1 pg/mL（≤1 飞克注射）的 17β-雌二醇进行检测（见 Macherone，等 ）。但当使用电子电离 (EI) 模式，不同环境样品的水中 17β-雌二醇的方法检出限 (MDL) 约为 1 ng/L 或 1 pg 进样量（结果研究请参考安捷伦应用简报 5990-9988EN ）。新的 Agilent 7010 三重四极杆气质联用系统配备了超高效离子源，在 EI 模式下允许通过单步衍生化步骤使 17β-雌二醇达到飞克级的检测水平。
安捷伦最高惰性样品流路的 GC/MS 解决方案
在本研究中，使用 17β-雌二醇对 Agilent 7010 三重四极杆气质联用系统进行评估，并测得仪器的检出限 (IDL) 约为 26 fg；见图 1 。17β-雌二醇和 17β-雌二醇-D5 内标的 TMS 衍生物的制备如下：将 100 μL BSTFA (99%) - TMCS (1%)、100 μL 的无水吡啶和 800 μL 无水乙腈加入到分别含有 10 μg 和 1μg 样品的样品瓶中。该样品瓶中的溶液已事先经过氮气吹干。将样品瓶在 60 ℃ 下加热 30 分钟。使用衍生化试剂稀释衍生的 17β-雌二醇，以制备浓度为 0.05、0.1、0.5、1、5 和 10 ng/mL 的工作标样。稀释衍生化的内标，并加入至 50 μL 等份的工作标样以制备一系列校准标样。
仪器配置包括 Agilent 7010 三重四极杆气质联用系统和配备了多模式进样口 (MMI) 的 Agilent 7890B 气相色谱仪。为获得最大惰性的样品流路，使用了以下安捷伦部件：超高惰性的 HP-5MSUI 气相色谱柱，规格为 15 m x 0.25 mm，0.25 μm (19091S-431UI) 和超高惰性 2 mm 凹形衬管 (5190-2297)。气相色谱参数设置如安捷伦应用简报 5990-5513CHCN 中所述，除了使用 1 μL 的进样量以外，其余参数请参考文献，除非另有说明。离子源温度设为 280 ℃，将增益值设定为 10。
我们的方法学包括进样 12 针 200 fg（2 µL 0.1 ng/mL 工作标样）17β-雌二醇-TMS 的序列来计算 IDL（99% 置信区间，N = 8）。
IDL = (t* RSD* 浓度 )/100
t = t 值，99% 的置信度，n-1 自由度 (2.998)
RSD = 最小相对标准偏差
六组标样连续 5 次进样，以第三组或中间组进行校准。使用无权重的线性拟合曲线，线性回归曲线上显示为蓝色三角形的所有其它点指定用作 QC，如图 3 所示。试剂空白在标样之间注入。
使用简单、一步到位的衍生步骤和 EI 模式下的
Agilent 7010 三重四极杆检测更低浓度的 17β-雌二醇
分析仪器所需的重复性体现在仪器检测限或 IDL 上。事实上，USEPA、IUPAC 和其他权威的组织采用类似的计算方法，以确定分析方法的最低检测限（请阅读这个月的 Access Agilent 文章还原质谱灵敏度指标的有效性与安捷伦出版文献 5990-9436CHCN，了解安捷伦如何使用 IDL，这一更加准确和可靠的超低噪音的 GC/MS 性能指标使客户受益）。
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图 1. 计算的 17β-雌二醇-TMS 的仪器检出限 (IDL) 为 25.9 fg
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图 2. 试剂空白、0.05 和 0.5 ng/mL 纯 17β-雌二醇-TMS 标样进样各 1 μL 的色谱图
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图 3. 0.05-10 ng/mL 17β-雌二醇-TMS 的线性范围
图 1 的结果显示 IDL = (2.998 * 4.30* 200)/100 = 25.9 fg。
图 2 显示为三次进样在 Agilent MassHunter 定量软件保留时间窗口内的 MRM transition m/z 416 → 285.1 结果。您会发现试剂空白不含分析物污染。
图 3 显示的结果中，圆圈代表校准点，三角形代表指定的 QC 点。曲线拟合为线性（不加权），进样量为 50-10000 fg。
仪器灵敏度增加可获得更好的检测结果和更低的运输成本
高灵敏度的新型 Agilent 7010 三重四极杆气质联用系统在 EI 模式下，使用简单的一步衍生步骤实现对更低浓度 17β-雌二醇的检测。我们从未停止对更低检出限和更低操作成本的追寻。目前我们正在对一组分析物进行进一步测试，其结果预期将有助于减少环境水样量（目前多达 1 升），从而实现更小体积的样品运输，节约成本。
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