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稳定、可重现地测定单克隆抗体滴度

作者：Phu T. Duong
安捷伦生物色谱柱应用化学家

单克隆抗体 (MAb) 滴度的表达以及从细胞培养液中进行捕集需要在工艺开发过程中提高分析速度、定量准确度并实现精确测定。Agilent Bio-Monolith Protein A 亲和色谱柱能够快速回收各种浓度的 MAb 并准确测定其滴度。Agilent Bio-Monolith Protein A 亲和色谱柱设计用于分析分离除第 3 类以外的所有人类和小鼠免疫球蛋白 (IgG)，可助您优化细胞培养基。其独特的整体式设计能够实现快速分离，适用于高流速条件，可提高定量准确度并延长色谱柱使用寿命。

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图 1. 众多选择：洗脱缓冲液对 IgG1 峰高和峰形的影响。进样：将 4 µL 1.25 mg/mL 的 IgG1 与 20 mg/mL 的大肠杆菌蛋白质混合

在下列示例中，我们展示了这款高度可靠且重现性的色谱柱如何实现较长的柱寿命并最大限度减少堵塞，即使是分析复杂样品。因此，您不必经常性地清洗或更换色谱柱。

聚合物填料在适合酸性 pH 下表现优异

图 1 显示了洗脱缓冲液对 Agilent Bio-Monolith Protein A 色谱柱的影响。数据清楚地表明，您可以用许多不同的酸性缓冲液（甚至 pH 低至 1.9 的 HCl 溶液）洗脱 IgG1 峰，因为该色谱柱采用的是稳定的聚丙烯酸甲酯填料。pH 为 2.8 的甘氨酸、柠檬酸和乙酸也可用作有效的缓冲液。利用这些洗脱液可得到非常类似的 IgG1 色谱峰高，尽管保留时间不同。除 100 mM 乙酸以外，采用其他洗脱液得到的峰形和峰宽也非常相似。然而，当该洗脱缓冲液浓度增加至 500 mM 时，得到的峰高和峰形足以与其他洗脱缓冲液得到的结果相媲美。

堵塞少，易清洁

我们评价了连续 300 次进样时色谱柱的重现性，结果如图 2 和表 1 所示。每隔 20 次进样，我们使用不含样品的三次进样作为清洗步骤，以助于从色谱柱上洗脱尽可能多的残留物。您可以看到保留时间、峰面积和峰宽保持不变。该色谱柱不会损失其结合和分离 IgG1 的能力，此时不需要原位清洗。

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图 2. Agilent Bio-Monolith Protein A 色谱柱在原位清洗之前进样 300 次得到的重现性。进样：将 1 µL 1.25 mg/mL 的 IgG1 与 10 mg/mL 的大肠杆菌蛋白质混合

进样次数	IgG1 保留时间 (min)	IgG1 峰面积 (mAu/s)	IgG1 峰宽 (min)
10	1.48	89	0.2
50	1.48	88	0.2
100	1.48	88	0.2
150	1.48	87	0.2
200	1.48	88	0.2
300	1.48	87	0.2

表 1. 原位清洗之前进样 300 次得到的 IgG1 的保留时间、峰面积和峰宽。在 n = 300 的情况下，标准偏差为 0.75

背压升高、峰分裂、峰高减小以及材料的结合/吸附能力下降，这些均表明色谱柱需要进行清洗。尽管 Agilent Bio-Monolith Protein A 色谱柱能够连续运行更多次，但最好在出现这些迹象之前就对色谱柱进行清洗（通常在运行 20 至 50 次之后）。

关于这些研究的详细信息在我们最新的 Bio-Monolith Protein A 应用简报 (5991-2990EN) 中有所描述。

可重现的亲和色谱

Agilent Bio-Monolith Protein A 色谱柱具有较高的性能，可满足您对可重现的亲和色谱的需求。Bio-Monolith Protein A 亲和色谱柱具有经特殊设计的连续短聚合物柱床的所有优势。这些固有特征能够实现从细菌培养基上清液高重现性地分离和定量分析 IgG。分离与流速无关，不存在扩散、不含孔且没有死体积。流动相与固定相之间传输非常快，可加速方法开发并降低成本。

这些色谱柱仅仅是安捷伦生物分离系列产品的组成部分，其中包括在多肽和蛋白质的分离和鉴定方面具有一致、卓越的性能的安捷伦生物色谱柱。立即了解更多关于这些色谱柱的信息。

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