为确保高效液相色谱系统正常运行,对流动相和样品进行过滤至关重要。为尽量减小驻留体积和样品扩散,当流动相和样品通过 HPLC 系统的各个组件时,该仪器内部的管线通常会变窄。未过滤的流动相和/或样品必然会导致系统堵塞和压力过大。
过滤流动相
如果流动相将通过泵系统(在二元泵或四元泵系统中)进行混合,通常不需要对高纯度有机溶剂进行过滤。但是,应当对全部缓冲溶液进行过滤以除去未溶解的颗粒。即使使用的是高纯度缓冲液(例如 ACS 级),也应当进行过滤。
如果 HPLC 方法需要使用预先混合的含两种或三种组分的流动相,则应当单独过滤每一组分,再将其混合。由于真空抽滤是最理想的过滤方式,因此在过滤之前混合各种组分可能会导致流动相中挥发性较强的组分蒸发,从而使各个组分的有效百分比发生改变。
过滤流动相时,通常采用 0.45 μm 过滤器。对于亚 2 μm 色谱柱,其滤芯可低至 0.5 μm,可考虑选用 0.2 μm 过滤器。采用 0.2 μm 过滤器可防止小颗粒在滤芯中积聚,避免色谱柱报废。在选择过滤器材料时,确保过滤器可耐受待过滤的液体。
流动相的水相中可能滋生微生物,在流动相溶剂瓶或流动相通过的任何脱气单元中均可能发生该现象。当观察到溶剂瓶中出现任何浑浊时,应立即更换其中的液体。最好在溶剂瓶上标明缓冲溶液的配制日期以及有效日期。如果配有脱气通道,请用异丙醇定期冲洗以除去任何积聚的微生物。
过滤样品
对于要注入 HPLC 系统的任何样品,都必须进行过滤。无论采用何种方法制备样品,基质中都有可能发生小颗粒残留。与流动相过滤类似,确保使用适当孔隙率的过滤器。
在样品过滤时,请确保过滤器适用于样品基质和分析物。如果样品过滤器对待分析化合物具有亲和性,则过滤器上可能会出现不期望的样品保留。广泛使用的材料是再生纤维素。该材料对标准的水相溶剂和有机相溶剂具有优异的化学耐受性,并且对生物样品具有极低的亲和性,从而可获得极高的样品回收率。
通过采取适当的措施,可以避免 HPLC 系统中发生麻烦的流路堵塞问题。要了解有关减少流路堵塞的更多信息,请访问安捷伦注射式过滤器的产品页面。